【摘要】 二氧化碳培養(yǎng)箱提供了細胞生長環(huán)境, 為了正確使用, 根據(jù)它的結(jié)構(gòu)和性能要求, 介紹培養(yǎng)箱正確使用方法、常見故障的預防和處理。
 
【關鍵詞】 二氧化碳; 設備和供應; 維修

 多數(shù)細胞培養(yǎng)時需 37 ℃、5 %CO2 張力和飽和濕度的生長條件, CO2培養(yǎng)箱提供了細胞生長環(huán)境。 目前G內(nèi)生物研究室多數(shù)使用的是熱導型培養(yǎng)箱, 每臺 4.5 萬～ 5 .5 萬元, 使用壽命 10 年。 從中南地區(qū)和我校報廢維修資料看, 平均使用壽命是 6.5 年, 其主要原因是傳感器損壞。 CO2培養(yǎng)箱價格昂貴,我們期望它按期或過期服役, 為正確使用, 根據(jù)它的結(jié)構(gòu)和性能要求, 現(xiàn)介紹培養(yǎng)箱的正確使用方法、常見故障的預防和處理。
1.溫度傳感器保護:培養(yǎng)箱溫度由溫度傳感器控制, 它的正常運行需要 25 ℃室溫條件。 常規(guī)使用時, 箱內(nèi)放 1 ～ 2 支水銀溫度計作為溫度對照。 溫度傳感器的正確運行, 使設定溫度數(shù)、箱面顯示數(shù)和箱內(nèi)溫度三者一致。 當室溫高于 30 ℃時, 溫度傳感器調(diào)節(jié)功能失靈, 出現(xiàn)箱面顯示溫度高于設定數(shù), 箱內(nèi)溫度又高于箱面溫度, 并常伴隨警告聲。 此現(xiàn)象發(fā)生在白天,降低室溫, 培養(yǎng)箱溫度恢復正常運行。 若發(fā)生在晚上, 持續(xù)高溫使細胞死亡。 為避免這一現(xiàn)象發(fā)生, 夏季使用培養(yǎng)箱時, 無菌室應保持 25 ℃左右室溫。
2.氣體傳感器保護:箱內(nèi)氣壓由 CO2  氣體傳感器控制。
CO 2 傳感器正常反饋要求進氣壓為 0 .06 兆帕。 開門后, 箱內(nèi)氣體丟失, CO2 壓力下降。 關門后, CO 2 傳感器在低壓刺激下有節(jié)奏地開閉, 向箱內(nèi)慢慢充氣, 當進氣壓達 0 .06 兆帕時, 自動停止調(diào)節(jié)。 換氣瓶時, 部分實驗者針對進氣壓, 采用加大進氣壓的快速充氣法, 使用 0.1 兆帕甚** 0 .2 兆鉑壓力, 無形中損傷了 CO2 傳感器。 開始這種損傷效應不能顯示, 實驗者不能察覺, 反復錯誤操作, CO 2 傳感器損傷累積**終致命損壞, 使氣壓調(diào)節(jié)失靈。 當實驗者發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基顏色變化異常、細胞生長緩慢時, 已無法挽救損壞。 1 個氣體傳感器需 1 .6 萬元, 更換 1個也不易。 因此, CO2  傳感器壽命與 CO 2 進氣壓大小有關, 只要做好進氣壓調(diào)節(jié), 就能保護 CO2  傳感器性能。 為做好進氣壓調(diào)節(jié), 現(xiàn)將氣壓調(diào)節(jié)歸納為 4 句話 17 個字:反時針松捍, 接氣瓶, 順時針減壓, 進氣壓 0.06 。 安民告示, 張貼箱門, 使每個實驗者都會操作。 為防止漏氣, 在氣瓶出口處填膠皮, 氣壓表接頭處纏封口帶, 氣瓶與氣壓表連接后, 肥皂水試驗, 接口無氣泡出現(xiàn)為連接合格。
3.CO 2 零點飄移監(jiān)控:培養(yǎng)箱使用過程中, CO2  氣壓零點會發(fā)生自然飄移現(xiàn)象, 這種現(xiàn)象不能在箱面氣體顯示框中表現(xiàn)出來, 實驗者也不易覺察到飄移結(jié)果細胞培養(yǎng)液顏色變化異常、細胞生長緩慢甚**死亡。 CO 2 氣壓零點是否飄移, 可通過CO 2 氣體測試儀, 取箱內(nèi)氣體檢查確定。 如我們測試了 6 臺細胞培養(yǎng)箱, 它們的顯示值都為 5 %, 測試結(jié)果為 2 臺箱內(nèi)外氣壓值一致, 其余 4 臺中箱內(nèi)氣壓值**高 18 %, **低 0 .5%, 這些異常氣壓值培養(yǎng)箱影響了細胞實驗結(jié)果。 因此, 實驗室應建立CO 2 氣壓零點測試制度, 通常每 3 個月進行 1 次, 以保證 CO2氣壓實際使用值的正確。
4.培養(yǎng)箱飽和濕度監(jiān)控 :CO2培養(yǎng)箱使用過程中, 要求在箱內(nèi)托盤中放一定量的滅菌水(3/ 2 **全盤), 使箱內(nèi)為飽和濕度環(huán)境, 這是針對開放培養(yǎng)細胞要求設計的。 因為飽和濕度環(huán)境可以避免培養(yǎng)液中 CO2 逃逸, 培養(yǎng)液中 pH 值穩(wěn)定 , 有利于細胞生長。 實際使用過程中, 實驗者常忘記補加水, 使培養(yǎng)細胞處于低濕度甚**干熱環(huán)境中, 培養(yǎng)液 CO2  氣體易揮發(fā), 液體pH 值升高, 影響細胞生長。 為避免此問題發(fā)生, 我們采用箱面大字警告和值日生負責制相結(jié)合的方法, 能較好地落實這一措施。 此外, 針對箱內(nèi)濕熱環(huán)境易滋生細菌等問題, 我們采用在 1 000ml 水中加 2ml 新潔爾滅液, 定期用酒精和紫外線消毒箱內(nèi)空氣, 培養(yǎng)物酒精擦拭入箱內(nèi), 以減少箱內(nèi)微生物滋生速度。 實驗多時, 箱內(nèi)分區(qū)存放, 培養(yǎng)物用筐或瓷盤存放, 這樣存取快速, 縮短開門時間 , 減少箱內(nèi)氣體和濕度變化, 節(jié)省氣體,穩(wěn)定了細胞生長環(huán)境。
綜上所述, 在二氧化碳培養(yǎng)箱使用過程中, 只要做好室溫、濕度和 CO2  氣壓零點測試糾正工作, 就能保證二氧化碳培養(yǎng)箱正常運行, 使它真正成為培養(yǎng)細胞舒適的搖藍。